結(jié)果顯示,35%的GLUT1蛋白在HeLa細胞膜上是與脂筏結(jié)構(gòu)共定位的,其余部分則可能位于別的成分組成的脂筏結(jié)構(gòu)或者非脂筏結(jié)構(gòu)中
為驗證GLUT1蛋白的成簇與脂筏存的關(guān)系,我們用雙色dSTORM成像分別對HeLa細胞頂膜上的脂筏結(jié)構(gòu)(圖A)和GLUT1蛋白(圖B)進行成像。從圖A可以觀察到脂筏在細胞膜上也是形成大小不同的簇狀結(jié)構(gòu)。通過將脂筏(圖A)和GLUT1蛋白(圖B)的超分辨重構(gòu)圖進行疊加,我們發(fā)現(xiàn)在二者的疊加圖(圖C)上,兩種簇結(jié)構(gòu)存在一定程度的共定位關(guān)系。接下來我們對這種共定位用Mander's系數(shù),M1和M2,進行定量分析。通過計算和統(tǒng)計每個細胞樣品上所有區(qū)域的共定位系數(shù),我們得到了脂筏和GLUT1蛋白的在HeLa細胞表面每種位置關(guān)系的百分比。其中高度重疊和部分重疊這兩部分被統(tǒng)一看作GLUT1與脂筏共定位。結(jié)果顯示,35%的GLUT1蛋白在HeLa細胞膜上是與脂筏結(jié)構(gòu)共定位的,其余部分則可能位于別的成分組成的脂筏結(jié)構(gòu)或者非脂筏結(jié)構(gòu)中。這暗示我們GLUT1團簇結(jié)構(gòu)的形成不僅有脂筏結(jié)構(gòu)的影響,同時可能有別的因素影響GLUT1蛋白的聚集。同時,這種維持細胞膜天然狀態(tài)的成像也更加直觀的讓我們看到了GLUT1蛋白與脂筏結(jié)構(gòu)之間的關(guān)系。
如圖 揭示HeLa細胞膜上脂筏與GLUT1之間相對空間分布的雙色dSTORM成像。(A和B)在同一細胞膜上用Alexa 647偶聯(lián)CT-B標(biāo)記的脂筏結(jié)構(gòu)(A)和用Alexa 532偶聯(lián)GLUT1抗體標(biāo)記的GLUT1蛋白(B)的dSTORM重構(gòu)圖。(C)顯示脂筏(紅)和GLUT1共定位的雙色dSTORM 疊加圖。(D-G)GLUT1和脂筏四中不同位置關(guān)系的代表圖,依次為重疊(D),部分重疊(E),邊緣相接(F)和分離(G)。(H)四中定位關(guān)系所占比例的統(tǒng)計分析柱狀圖。圖A-C標(biāo)尺:5 μm;D-G標(biāo)尺:200 nm。