推測GLUT1蛋白簇不能跟富含GM1的脂筏結(jié)構(gòu)完全共定位的原因可能有兩個aGLUT1蛋白可能與由其他成分組成的脂筏結(jié)構(gòu)共定位分布
推測GLUT1蛋白簇不能跟富含GM1的脂筏結(jié)構(gòu)完全共定位的原因可能有兩個:(a)GLUT1蛋白可能與由其他成分組成的脂筏結(jié)構(gòu)共定位分布;(b)其他因子參與調(diào)控GLUT1蛋白成簇。因此,我們決定先進一步確定脂筏結(jié)構(gòu)在GLUT1成簇過程中的作用。由于脂筏是富含膽固醇和鞘磷脂的結(jié)構(gòu)域,所以可以通過抽提膽固醇來破壞脂筏結(jié)構(gòu)的完整性。為了進一步證實脂筏在GLUT1蛋白簇與脂筏結(jié)構(gòu)的關(guān)系,我們首先用10 mM的Methyl-β-cyclodextrin(M-β-CD)抽提膽固醇,破壞細胞膜的脂筏結(jié)構(gòu)。接下來,我們用dSTORM成像技術(shù)對正常細胞和脂筏被破壞細胞上的GLUT1進行成像觀察。圖中A-D顯示了M-β-CD處理前后,GLUT1蛋白在HeLa細胞膜表面上成簇分布的變化??梢钥吹侥懝檀急怀樘岷?,許多GLUT1蛋白簇的尺寸變小,有的甚至消失。結(jié)果顯示在脂筏結(jié)構(gòu)被破壞后GLUT1的成簇能力和簇大小都明顯減小。
如圖. 脂筏結(jié)構(gòu)被破壞后GLUT1蛋白簇的變化。(A-D)HeLa細胞膜上GLUT1在正常細胞(A)和M-β-CD處理細胞(C)上的dSTORM重構(gòu)圖,及其白色框選中區(qū)域相應(yīng)的放大圖(B和D)。其中A和C圖的標(biāo)尺是5 μm,圖B和D的標(biāo)尺是2μm。(E)正常和M-β-CD處理細胞的代表性的Ripley's K函數(shù)曲線圖。(F)單位面積簇個數(shù)。(G)單位面積內(nèi)單獨分布的GLUT1分子和包含不同分子數(shù)目的GLUT1團簇數(shù)目。