STED 顯微鏡，即受激發(fā)射損耗顯微鏡，是一種具有超高分辨率的先進顯微鏡技術(shù)。它通過特殊的激光技術(shù)，突破了傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡的分辨率極限，能夠?qū)崿F(xiàn)更精細的結(jié)構(gòu)成像。 其具有高對比度，可提供清晰圖像，有利于對樣品細節(jié)的觀察與分析。并且，該顯微鏡可通過特異性標(biāo)記，選擇性地顯示目標(biāo)結(jié)構(gòu)，適用范圍廣泛，包括生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料科學(xué)等多個領(lǐng)域。此外，它對各種類型的樣品具有較好的兼容性。 STED 顯微鏡的工作原理是抑制非焦點區(qū)域的熒光發(fā)射，從而提高分辨率。在實際應(yīng)用中，它為生命科學(xué)等相關(guān)領(lǐng)域的研究提供了重要的技術(shù)支持。
· 40nm空間分辨率
· 單像素時間0.5毫秒
· 激發(fā)波長576nm和647nm
· 測量模式：XY/XZ/XYZ
· AFM聯(lián)用模式：同步成像/引導(dǎo)成像兩種測量模式
CNPPVPdots和PDFDPPdots的STED成像。(a)雙色STED 納米鏡的簡化結(jié)構(gòu)。(b)CNPPVPdots和PDFDPPdots的共焦和STED圖像。兩種類型的Pdots的信號分別由APD1（探測器1）和APD2（探測器2）記錄。像素停留時間，1ms；視野，4.2×4.2μm2；200×200像素；~160秒/幀。(c)fwhm隨STED 光束激光功率的變化從0增加到3mW(0?10MW/cm2).（d，e）粒子的強度分布，用(b)中的白色箭頭表示，表示兩個Ppots 的fwhm。在STED模式下區(qū)分了兩個位置緊密的PDFDPPdot粒子。
和STED模式線性分離后混合粒子和細胞樣品的雙色成像。從左到右：(a)CNPPV點和PDFDP點的混合物，CNPPV 標(biāo)記的(b)CD44，CNPPV和PDFDP點標(biāo)記的CD44，CNPPV點標(biāo)記的(c)溶酶體和PDFDP點標(biāo)記的CD44CD44，PDFDP點標(biāo)記的(d)溶酶體和CNPPV點標(biāo)記的CD44。消耗功率，10MW/cm2；像素停留時間，1ms；200×200像素。
雙色STED成像和核內(nèi)體相互作用的比色分析。(a)兩種Pdots標(biāo)記核內(nèi)體的共聚焦和STED圖像。白色箭頭表示通過STED納米鏡可以識別相鄰的核內(nèi)體。消耗功率，10MW/cm2；比例尺，2μm（上面板），1μm（下面板）；像素停留時間，0.5ms；視場，10×10μm2；150×150像素；~40秒/幀。(b)通過共聚焦和STED圖像獲得的核內(nèi)體的大小分布。(c)通過雙色STED納米鏡實時監(jiān)測四個個體核內(nèi)體在不同時間的位置。感興趣的區(qū)域，2×2μm2；損耗功率，10MW/cm2；像素停留時間，0.5ms；原始數(shù)據(jù)中的視場，10×10μm2；150×150像素；~40秒/幀；下一幅圖像前的休息時間，<1s。(d)在(c).中核內(nèi)體的動態(tài)相互作用示意圖(e)(c).中顯示的四個核內(nèi)體的軌跡(f)比色比值（R、Fl綠色的/Fl紅色的)，顯示為一個綠色的三角形(RA，核內(nèi)體A)，橙色正方形(RB，藍色星體(RC和紫色的點(RD，分別在它們的相互作用過程中。(g)網(wǎng)格蛋白來源的核內(nèi)體和小泡蛋白-1陽性核內(nèi)體的相互作用模型示意圖。
Pdots的超分辨率成像。Pdots的a)共聚焦和STED圖像。在相同的Pdots有和沒有760 nm耗盡光束阻塞的情況下，分別獲得了共焦和STED圖像。b)FWHM隨STED光束激光功率從0到3 mW(0~10MWcm?2).c)(a)中相應(yīng)的白線所指的單個Pdot的強度輪廓，顯示了Pdots的FWHM。
HeLa細胞中Pdots的長期STED生物成像。a).HeLa細胞攝取生物素-pdots的共聚焦和STED圖像。兩個緊密間隔的NPs（用藍色箭頭表示）僅在STED圖
像中被區(qū)分。b)由(a).中的線所表示的Pdots的強度輪廓STED光束功率保持在3 MW厘米.3?2.c)2小時內(nèi)HeLa細胞中生物素-pdots和生物素-atto565的長期STED持續(xù)成像繼續(xù)成像(視野35 × 35 μm2).d)蛋白中Pdots和Atto565的熒光強度變化。
線交換方法消除40納米°月珠成像串?dāng)_的性能。(a)和(b)是通道1檢測到的°新月珠（Ex/Em： 580/605nm）的共聚焦和STED圖像。(c)是通道2檢測到的通道1的°月珠的STED圖像。(d)和(e)是通道2檢測到的°新月珠（Ex/ Em： 660/680nm）的共聚焦和STED圖像。(f)為通道1檢測到的通道2的°月形珠的STED圖像。比例尺：2um。
線開關(guān)STED成像模式下微管的超分辨率共定位分析。用免疫熒光用ATTO 594染料標(biāo)記的微管的(a) STED成像。用ATTO647°染料免疫染色標(biāo)記的(a)對同一區(qū)域的微管進行(b) STED成像。(c)是(a)和(b).的疊加物對水平和垂直方向的(d)高斯曲線進行共定位分析。
40nm混合°月珠的雙色STED成像。40nm新月珠（Em：580/605nm）的共聚焦(a)和STED (d)成像。混合珠（40nm/Em：660/680nm）的共聚焦(b)和STED (e)成像。(c)是(a)和(b).的疊加(f)是(d)和(e)的疊加數(shù)。在面板(c)和(f)中，左下角用白色虛線框標(biāo)記的兩個區(qū)域被標(biāo)記并顯示在右上角。比例尺：2um。
網(wǎng)格蛋白和小泡內(nèi)吞囊泡的STED超分辨率成像。網(wǎng)格蛋白囊泡的共聚焦(a)和STED (b)成像，其中網(wǎng)格蛋白用ATTO 647N偶聯(lián)的二抗標(biāo)記。小泡的共聚焦(c)和STED (d)成像，其中小泡蛋白-1用ATTO 647N偶聯(lián)的二抗標(biāo)記。比例尺：2um。
網(wǎng)格蛋白和小泡的雙色STED超分辨率成像。(a)共聚焦成像。(b) STED成像。同時用ATTO 594或ATTO 647N偶聯(lián)的二抗標(biāo)記網(wǎng)格蛋白和cavolin-1的內(nèi)源性蛋白。比例尺：2um。
網(wǎng)格蛋白與小泡內(nèi)吞泡的融合狀態(tài)。(a)不同程度融合的網(wǎng)格蛋白和小泡的雙色STED成像。(b)網(wǎng)格蛋白與融合不同程度的小泡示意圖。比例尺：2um。
· 40nm空間分辨率
· 單像素時間0.5毫秒
· 激發(fā)波長576nm和647nm
· 測量模式：XY/XZ/XYZ
· AFM聯(lián)用模式：同步成像/引導(dǎo)成像兩種測量模式
CNPPVPdots和PDFDPPdots的STED成像。(a)雙色STED 納米鏡的簡化結(jié)構(gòu)。(b)CNPPVPdots和PDFDPPdots的共焦和STED圖像。兩種類型的Pdots的信號分別由APD1（探測器1）和APD2（探測器2）記錄。像素停留時間，1ms；視野，4.2×4.2μm2；200×200像素；~160秒/幀。(c)fwhm隨STED 光束激光功率的變化從0增加到3mW(0?10MW/cm2).（d，e）粒子的強度分布，用(b)中的白色箭頭表示，表示兩個Ppots 的fwhm。在STED模式下區(qū)分了兩個位置緊密的PDFDPPdot粒子。
和STED模式線性分離后混合粒子和細胞樣品的雙色成像。從左到右：(a)CNPPV點和PDFDP點的混合物，CNPPV 標(biāo)記的(b)CD44，CNPPV和PDFDP點標(biāo)記的CD44，CNPPV點標(biāo)記的(c)溶酶體和PDFDP點標(biāo)記的CD44CD44，PDFDP點標(biāo)記的(d)溶酶體和CNPPV點標(biāo)記的CD44。消耗功率，10MW/cm2；像素停留時間，1ms；200×200像素。
雙色STED成像和核內(nèi)體相互作用的比色分析。(a)兩種Pdots標(biāo)記核內(nèi)體的共聚焦和STED圖像。白色箭頭表示通過STED納米鏡可以識別相鄰的核內(nèi)體。消耗功率，10MW/cm2；比例尺，2μm（上面板），1μm（下面板）；像素停留時間，0.5ms；視場，10×10μm2；150×150像素；~40秒/幀。(b)通過共聚焦和STED圖像獲得的核內(nèi)體的大小分布。(c)通過雙色STED納米鏡實時監(jiān)測四個個體核內(nèi)體在不同時間的位置。感興趣的區(qū)域，2×2μm2；損耗功率，10MW/cm2；像素停留時間，0.5ms；原始數(shù)據(jù)中的視場，10×10μm2；150×150像素；~40秒/幀；下一幅圖像前的休息時間，<1s。(d)在(c).中核內(nèi)體的動態(tài)相互作用示意圖(e)(c).中顯示的四個核內(nèi)體的軌跡(f)比色比值（R、Fl綠色的/Fl紅色的)，顯示為一個綠色的三角形(RA，核內(nèi)體A)，橙色正方形(RB，藍色星體(RC和紫色的點(RD，分別在它們的相互作用過程中。(g)網(wǎng)格蛋白來源的核內(nèi)體和小泡蛋白-1陽性核內(nèi)體的相互作用模型示意圖。
Pdots的超分辨率成像。Pdots的a)共聚焦和STED圖像。在相同的Pdots有和沒有760 nm耗盡光束阻塞的情況下，分別獲得了共焦和STED圖像。b)FWHM隨STED光束激光功率從0到3 mW(0~10MWcm?2).c)(a)中相應(yīng)的白線所指的單個Pdot的強度輪廓，顯示了Pdots的FWHM。
HeLa細胞中Pdots的長期STED生物成像。a).HeLa細胞攝取生物素-pdots的共聚焦和STED圖像。兩個緊密間隔的NPs（用藍色箭頭表示）僅在STED圖
像中被區(qū)分。b)由(a).中的線所表示的Pdots的強度輪廓STED光束功率保持在3 MW厘米.3?2.c)2小時內(nèi)HeLa細胞中生物素-pdots和生物素-atto565的長期STED持續(xù)成像繼續(xù)成像(視野35 × 35 μm2).d)蛋白中Pdots和Atto565的熒光強度變化。
線交換方法消除40納米°月珠成像串?dāng)_的性能。(a)和(b)是通道1檢測到的°新月珠（Ex/Em： 580/605nm）的共聚焦和STED圖像。(c)是通道2檢測到的通道1的°月珠的STED圖像。(d)和(e)是通道2檢測到的°新月珠（Ex/ Em： 660/680nm）的共聚焦和STED圖像。(f)為通道1檢測到的通道2的°月形珠的STED圖像。比例尺：2um。
線開關(guān)STED成像模式下微管的超分辨率共定位分析。用免疫熒光用ATTO 594染料標(biāo)記的微管的(a) STED成像。用ATTO647°染料免疫染色標(biāo)記的(a)對同一區(qū)域的微管進行(b) STED成像。(c)是(a)和(b).的疊加物對水平和垂直方向的(d)高斯曲線進行共定位分析。
40nm混合°月珠的雙色STED成像。40nm新月珠（Em：580/605nm）的共聚焦(a)和STED (d)成像?；旌现椋?0nm/Em：660/680nm）的共聚焦(b)和STED (e)成像。(c)是(a)和(b).的疊加(f)是(d)和(e)的疊加數(shù)。在面板(c)和(f)中，左下角用白色虛線框標(biāo)記的兩個區(qū)域被標(biāo)記并顯示在右上角。比例尺：2um。
網(wǎng)格蛋白和小泡內(nèi)吞囊泡的STED超分辨率成像。網(wǎng)格蛋白囊泡的共聚焦(a)和STED (b)成像，其中網(wǎng)格蛋白用ATTO 647N偶聯(lián)的二抗標(biāo)記。小泡的共聚焦(c)和STED (d)成像，其中小泡蛋白-1用ATTO 647N偶聯(lián)的二抗標(biāo)記。比例尺：2um。
網(wǎng)格蛋白和小泡的雙色STED超分辨率成像。(a)共聚焦成像。(b) STED成像。同時用ATTO 594或ATTO 647N偶聯(lián)的二抗標(biāo)記網(wǎng)格蛋白和cavolin-1的內(nèi)源性蛋白。比例尺：2um。
網(wǎng)格蛋白與小泡內(nèi)吞泡的融合狀態(tài)。(a)不同程度融合的網(wǎng)格蛋白和小泡的雙色STED成像。(b)網(wǎng)格蛋白與融合不同程度的小泡示意圖。比例尺：2um。
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