通過研究，既然成簇分布是所有糖分子共有的分布特征，并且GlcNAc已被證實是細胞膜上的功能結構域，那么這些糖分子之間是否有聯(lián)系呢，它們是否都是膜上的功能結構域呢？我們進一步利用雙色dSTORM成像研究了目標糖分子和GlcNAc的空間定位關系。從超分辨疊加圖上（圖A-F左和中），我們發(fā)現(xiàn)目標糖分子（紅色）和GlcNAc（綠色）都有著明顯的共定位（黃色）。盡管Fuc和GlcNAc的疊加圖上黃色區(qū)域較弱，但這并不是共定位低造成的，而是由于Fuc簇本身就是最小的且簇密度也是最低的。類似于第二章中GlcNAc和脂筏的共定位分析，根據(jù)共定位區(qū)域（S）的大小，我們將二者的空間關系分為三類：彼此獨立（無接觸，白色框內）、互相關（相互接觸但S< 0.02 μm²，紫色框內）、共定位（S≥0.02 μm²，黃色框內），如圖A-F右所示。我們統(tǒng)計了這三類關系各自的比例來進一步表征目標糖分子和GlcNAc的分布關系。從共定位簇個數(shù)占目標糖分子簇個數(shù)或GlcNAc個數(shù)的百分比的分布圖來看（圖G和圖H），即使共定位最不明顯的Fuc，也有61.60±0.05%的Fuc簇和GlcNAc共定位；其他類型的目標糖分子則均表現(xiàn)出較高的共定位百分比：92.80±0.03%（Sia）、89.16±0.09%（oligosaccharide）、76.13±0.06%（Man）、84.14±0.04%（Gal）和68.30±0.08%（GalNAc）。反過來，以GlcNAc為“單位一”統(tǒng)計，所得結果是類似的。由于Fuc簇總數(shù)占GlcNAc簇總數(shù)的比例本身就較低，那么形成的共定位簇的個數(shù)占總GlcNAc簇的比例就相對其他目標糖分子稍低，為51.67±0.06%；與其他目標糖分子共定位的GlcNAc的比例都較高，分別為：92.12±0.05%（Sia）、94.73±0.05%（oligosaccharide）、87.72±0.05%（Man）、88.39±0.05%（Gal）和94.42±0.03%（GalNAc）。另外，我們通過共定位區(qū)域的面積大小來衡量兩個簇的重疊程度（圖I）。

  如圖：目標糖分子和GlcNAc的雙色超分辨及對二者分布關系的表征。（A-F）目標糖分子和GlcNAc的雙色dSTORM成像重構圖的疊加圖（左）；在相應的放大圖中，兩種糖分子的空間定位關系更加清晰（中）；三種定位關系的典型分布圖：彼此獨立（白色邊框）、共定位（紫色邊框）、互相關（藍色邊框）；目標糖分子依次為：Sia (A), oligosaccharide (B), Fuc (C), Man (D), Gal (E), 和 GalNAc (F)。標尺為：5 μm（左），1 μm（中），200 nm（右）。（G和H）共定位簇總數(shù)占目標糖分子簇（紅色柱）或GlcNAc簇（綠色柱）總數(shù)的比例分布圖。（I）共定位區(qū)域（黃色柱）的平均面積和目標糖分子簇（紅色柱）的原始平均面積的對比分布圖。（J和K）共定位簇總面積占目標糖分子簇（紅色柱）或GlcNAc簇（綠色柱）總面積的比例分布圖。