為評價超分辨率圖像的質(zhì)量，我們采用分塊傅里葉環(huán)相關(guān)（FRC）分辨率映射的方法檢測了MCF-7細胞膜上Cy3連接的小分子肽或抗體的分辨率。計算FRC時，將圖像分塊，每一塊代表不同的分辨率（圖a）。統(tǒng)計了5次實驗的10幅圖像的最小分辨率，得到小分子肽標(biāo)記圖像的平均最小分辨率為32.1 nm，抗體標(biāo)記為33.3 nm，結(jié)果非常相似，這兩種探針之間沒有顯著性差異（圖b），這是由于不同的標(biāo)記分子連接相同的染料導(dǎo)致的。雖然這兩種探針獲得的分辨率相似，但由于抗體的大尺寸和多個結(jié)合位點，標(biāo)記效率可能不同，這反映在飽和濃度、標(biāo)記密度和特異性識別方面。我們首先通過計算細胞膜上的定位密度來測量肽和抗體的飽和標(biāo)記濃度。兩種標(biāo)記物的定位密度曲線均先隨濃度的增加而增大，并最終保持穩(wěn)定。通過比較摩爾濃度，小分子肽染色在0.64 μM濃度下，為1225 ± 140 μm^-2個定位點，抗體在0.034 μM處達到1100 ± 117個定位點。此外，在兩種標(biāo)記的蛋白質(zhì)簇存在差異，用SR-Tesseler方法，對膜蛋白簇進行了分析，結(jié)果表明，肽比抗體識別的EpCAM簇面積要小，識別的簇個數(shù)要多于抗體（圖4-5d和4-5e），表明肽具有更強、更準(zhǔn)確的蛋白簇識別能力。
 
如圖——小分子肽和抗體對細胞膜上EpCAM的識別。（a）分別用Cy3結(jié)合的肽和抗體標(biāo)記EpCAM，傳統(tǒng)的圖像、相應(yīng)的dSTORM圖像和的FRC圖。標(biāo)尺，5 μm。（b）FRC分辨率的比較。(c?e)小分子肽和抗體標(biāo)記的EpCAM的定量分析：每平方微米的定位數(shù)（c）、簇個數(shù)（d）和平均簇面積（e）。