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抗體通常用來(lái)標(biāo)記膜蛋白,但抗體在標(biāo)記時(shí)有些限制,大尺寸容易增加定位的不準(zhǔn)確度。我們用抑制劑探針標(biāo)記細(xì)胞頂膜表面(圖a)和基底膜表面的PSMA,同時(shí)與抗體做了比較(圖b)。我們首先比較了兩種探針的標(biāo)記密度,結(jié)果顯示,對(duì)于頂膜表面來(lái)說(shuō),抑制劑探針單位面積的標(biāo)記密度達(dá)到2306 ± 152 μm-2,抗體只有1902 ± 102 μm-2,對(duì)于基底膜表面來(lái)說(shuō),這兩種探針的標(biāo)記密度差異達(dá)到801 μm-2,表明抑制劑探針能提供更好密度的PSMA識(shí)別能力,尤其對(duì)于細(xì)胞膜基底膜表面的PSMA,抗體存在不完全標(biāo)記現(xiàn)象(圖c)。除此之外,SR-Tesseler的方法也用來(lái)提取這兩種探針識(shí)別的簇信息。無(wú)論頂膜表面還是基底膜表面,單位面積內(nèi)抗體識(shí)別的簇都要比抑制劑至少少一個(gè)(圖d),除此之外,通過(guò)比較兩種探針識(shí)別的簇面積,我們發(fā)現(xiàn),對(duì)于頂膜表面來(lái)說(shuō),抑制劑識(shí)別的簇面積要小于抗體,說(shuō)明在飽和標(biāo)記的情況下,抑制劑探針識(shí)別的簇要小于抗體;而在基底膜表面,抑制劑探針識(shí)別的簇面積大約是抗體的2倍,說(shuō)明抑制劑的小尺寸使其比抗體更容易結(jié)合細(xì)胞膜基底膜表面的PSMA(圖e)。
以上結(jié)果表明了抑制劑探針具有更準(zhǔn)確的蛋白識(shí)別能力。傳統(tǒng)的抗體尺寸比較大,并且為多價(jià)態(tài),在識(shí)別膜表面的蛋白時(shí),容易導(dǎo)致交聯(lián)和潛在空間位阻,相比較而言,抑制劑探針尺寸較小,為單價(jià)態(tài),這些特征使其以高精度定位蛋白。因此,抑制劑探針可以識(shí)別更多的PSMA并且能更好的區(qū)分臨近的簇。
如圖 抑制劑探針和抗體探針標(biāo)記的區(qū)別。抑制劑探針和抗體對(duì)細(xì)胞頂膜表面(a)和基底膜表面(b)PSMA的超分辨成像。標(biāo)尺為5 μm。(c-e)對(duì)抑制劑探針和抗體標(biāo)記的超分辨圖像的定量分析:每平方微米的定位數(shù)(c)、簇個(gè)數(shù)(d)和平均簇面積(e)。